产品简介
本试剂盒基于 StarScript III 反转录酶开发的，采用茎环结构的逆转录引物与 miRNA 分子 3’ 端结合，在 StarScript III 反转录酶的作用下，获得人为加长的 miRNA 第一链 cDNA。
推荐使用通用的茎环序列为 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'，也可根据实验需求选择其它茎环序列。通常情况下，逆转录引物只需在茎环序列上添加目的 miRNA 3’ 端的 6 个反向互补碱基即可。 此方法特异性高，只对成熟的 miRNA 进行反转录，不受其前体干扰，序列高度同源的 miRNA 也可以精确区分。使用本产品获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测。染料法推荐使用本公司的 2×RealStar Fast SYBR qPCR Mix（Cat#A301），探针法推荐使用本公司的 2×RealStar Fast Probe Mix（Cat#A351），以获得更优的实验结果。
产品组分
| 组分名称 | A237-02 | A237-10 |
|---|---|---|
| StarScript III miRNA-L Enzyme Mix | 20 μl | 100 μl |
| 2×StarScript III miRNA-L Buffer | 200 μl | 1 ml |
| U6 Stem-loop RT Primer (5 μM)a | 20 μl | 100 μl |
| U6 qPCR-F (10 μM)b | 20 μl | 100 μl |
| Universal miRNA qPCR-R (10 μM)c | 30 μl | 150 μl |
| Nuclease-free Water (DEPC-treated) | 1 ml | 1.5 ml |
a U6 Stem-loop RT Primer 为人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参的逆转录引物，其它物种或其它内参需要根据物种序列重新设计。
b U6 qPCR-F 为人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参上游引物，可与通用下游引物 Universal miRNA qPCR-R 可在 qPCR 检测搭配使用
c Universal miRNA qPCR-R 为通用茎环下游引物，在检测目标 miRNA 时可设计 qPCR 上游引物与之搭配使用。如需要更多引物量，请参考补充说明 3 自行合成。
保存条件
-20℃ 保存，保质期 12 个月。
数据展示
茎环法 miRNA 反转录示意图
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请按照实际实验情况进行使用，如有疑问，请联系您的业务员或致电技术支持热线400-669-3332 拨 0！